کیت استخراج پلاسمید

توضیحات

کیت استخراج پلاسمید ستونی از باکتری 

با استفاده از کیت استخراج پلاسمید ستونی، فرآیند خالص‌سازی DNA پلاسمیدی دیگر یک کار پیچیده نیست. کیت استخراج پلاسمید ستونی از باکتری با استفاده از تکنولوژی ستون سیلیکا و بافرهای اختصاصی، DNA را با خلوص بالا و در زمانی کوتاه آماده استفاده می‌کند. برای آزمایش‌هایی که به دقت بالا نیاز دارند، این کیت یک انتخاب مطمئن است.

تأمین‌ کنندگان معتبر مواد شیمیایی و کیت آزمایشگاهی در مارکت پلیس بایوتکنولب، انواع کیت استخراج DNA را با بهترین کیفیت به مشتریان عرضه می‌کنند. امکان استعلام قیمت و خرید کیت استخراج پلاسمید برند KPG برای پژوهشگران و آزمایشگاه از طریق فروشگاه بایوتکنولب در کم ترین زمان فراهم شده است.

کیت استخراج پلاسمید ستونی چیست؟ محتویات کیت و کاربرد ها

کیت استخراج پلاسمید ستونی، یکی از پرکاربردترین ابزارها در آزمایشگاه‌های ژنتیک، کلونینگ و بیوتکنولوژی است. کیت استخراج پلاسمید ستونی از باکتری امکان استخراج سریع، خالص و بدون آلودگی DNA پلاسمیدی را از باکتری‌هایی مانند E. coli فراهم می‌کنند. با استفاده از روش قوی لیز قلیایی و خالص‌سازی توسط ستون سیلیکا (Silica spin column)، DNA پلاسمیدی آماده برای انواع کاربردهای پایین‌دستی از جمله کلونینگ، ترانسفکشن و سکانس‌یابی خواهد بود.

محتویات و اجزا سازنده کیت 

کاربرد های کیت استخراج پلاسمید

• استخراج پلاسمید برای کلونینگ ژن و ساخت وکتورها.
• تهیه DNA برای الکتروپوریشن یا ترانسفکشن سلول‌های یوکاریوت.
• آماده‌سازی پلاسمید برای توالی‌یابی Sanger.
• استفاده در PCR، RT-PCR، آنالیزهای آنزیمی و بیوانفورماتیکی.
• آموزش تکنیک‌های مولکولی در آزمایشگاه‌های دانشجویی و تحقیقاتی.

پروتکل کار با کیت استخراج پلاسمید ستونی KPG

1. آماده‌سازی باکتری:
   • حداقل 3×10⁹ CFU/mL باکتری (از کشت شب قبل یا تازه) را در 2 میلی‌لیتر آب مقطر استریل حل کنید.
   • به مدت 5 ثانیه ورتکس کرده و 2 دقیقه در 8000 rpm سانتریفیوژ کنید.
2. لیز سلولی:
   • رسوب باکتری را در 200 میکرولیتر محلول I حل کرده و ورتکس کنید.
   • 5 دقیقه در دمای اتاق انکوبه نمایید.
3. تخریب RNA و DNA کروموزومی:
   • 250 میکرولیتر محلول II را اضافه کنید، مخلوط را به آرامی برگردانید.
   • فقط 1 دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید (بیشتر از 1 دقیقه باعث تخریب پلاسمید می‌شود).
4. خنثی‌سازی:
   • 350 میکرولیتر محلول III اضافه کرده و مخلوط را با برگرداندن لوله به مدت 30 ثانیه مخلوط کنید.
5. رسوب‌دهی پروتئین‌ها و آلودگی‌ها:
   • 200 میکرولیتر محلول IV را اضافه و مخلوط کرده، سپس به مدت 5 دقیقه در 13000 ×g سانتریفیوژ کنید.
   • مایع رویی را به میکروتیوب جدید منتقل کنید.
6. رسوب پلاسمید:
   • 500 میکرولیتر محلول رسوب‌دهنده اضافه کرده، لوله را برگردانید تا خوب مخلوط شود.
7. مرحله ستونی:
   • لیزات را به ستون استخراج داخل تیوب جمع‌آوری اضافه کرده، 1 دقیقه در 12000 rpm سانتریفیوژ کنید.
   • در صورت باقی ماندن محلول، مرحله را تکرار کنید.
8. شستشو:
   • 500 میکرولیتر بافر شستشو را اضافه و 1 دقیقه در 12000 rpm سانتریفیوژ کنید.
   • سپس بدون تعویض تیوب، 1 دقیقه دیگر سانتریفیوژ نمایید.
9. الوشن (جدا کردن پلاسمید):
   • ستون را به یک میکروتیوب 1.5 میلی‌لیتری استریل منتقل کنید.
   • 50 میکرولیتر آب استریل DNase/RNase-Free (در دمای 65 درجه) اضافه کرده و 4 دقیقه انکوبه کنید.
   • سپس 2 دقیقه در 12000 rpm سانتریفیوژ کنید.
10. (اختیاری) انتقال مجدد محلول به ستون و تکرار سانتریفیوژ برای افزایش غلظت پلاسمید.

برای مطالعه جزئیات کار با این کیت و پروتکل کامل و تخصصی روی دانلود کاتالوگ محصول در بالای صفحه کلیک کنید.

شرایط نگهداری کیت

• تمام محلول‌ها را می‌توان در دمای اتاق (15–25 درجه سانتی‌گراد) تا ۱ سال نگهداری کرد.
• آب استریل DNase/RNase-Free در جای خشک، دور از نور و آلودگی نگهداری شود.
• نگهداری در یخچال برای ثبات بیشتر پیشنهاد می‌شود (به‌ویژه برای استفاده طولانی‌مدت).
• از یخ‌زدگی و انبار در محیط مرطوب خودداری شود.

 نکات ایمنی هنگام استفاده

• محلول‌های موجود در این کیت دارای خاصیت اکسیدکنندگی و اسیدی هستند.
• از تماس مستقیم با چشم و پوست شدیداً اجتناب کنید.
• در صورت تماس، محل آلوده را با مقدار زیاد آب شستشو داده و به مرکز درمانی مراجعه کنید.
• تمام مراحل استخراج را ترجیحاً در هود لامینار میکروبیولوژی انجام دهید.
• از تجهیزات استریل و بدون RNase/DNase استفاده شود تا نتایج استخراج تحت تأثیر قرار نگیرد.

خرید کیت استخراج پلاسمید در بایوتکنولب

در بایوتکنولب، امکان خرید کیت استخراج پلاسمید با قیمت مناسب و کیفیت تاییدشده فراهم است. این کیت‌ها از برندهای معتبر ایرانی و خارجی عرضه می‌شوند و همراه با تمام اجزای موردنیاز برای یک استخراج کامل و بی‌دردسر ارائه می‌شوند. پشتیبانی تخصصی، ارسال سریع و تضمین کیفیت از مزایای خرید از بایوتکنولب است.

سوالات پرتکرار (FAQs)

1. این کیت برای چه نوع پلاسمیدهایی مناسب است؟
   برای انواع پلاسمیدهای رایج در باکتری E. coli مانند وکتورهای کلونینگ، بیانی و شاتل مناسب است.
2. آیا این کیت قابل استفاده برای کشت شبانه است؟
   بله، با حجم 1 تا 5 میلی‌لیتر کشت شبانه استاندارد می‌توان استخراج پلاسمید را انجام داد.
3. تفاوت کیت استخراج پلاسمید به روش ستونی با روش رسوبی فنل/کلروفرم چیست؟
   کیت‌های ستونی سریع‌تر، ایمن‌تر و تکرارپذیرتر هستند و نیازی به حلال‌های آلی ندارند.
4. آیا همراه کیت، آنزیم RNase هم وجود دارد؟
   بله، اکثر کیت‌ های ستونی شامل RNase A برای حذف RNA هستند.