بافر TBE

بافر TBE  یا (Tris-Borate-EDTA) یکی از محلول‌های بافری محبوب است که به‌ طور گسترده در الکتروفورز ژل برای جداسازی DNA و RNA استفاده می‌شود. این بافر به‌دلیل حفظ پایداری pH و جلوگیری از تخریب اسیدهای نوکلئیک، به‌ ویژه در غلظت‌های 5X و 10X، کاربرد زیادی در آزمایشگاه‌های بیولوژی مولکولی دارد.

بافر TBE چیست؟

یک محلول بافری است که از ترکیب سه ماده اصلی: Tris، بورات و EDTA تهیه می‌شود. این ترکیب به‌دلیل قابلیت بافر کردن و پایدار نگه‌داشتن pH در طول فرآیند الکتروفورز بسیار کاربردی است. بافر TBE 1X نسخه رقیق‌شده استاندارد این بافر است که به‌طور معمول در آزمایش‌ها استفاده می‌شود.

تاریخچه

تاریخچه این بافر  به دهه 1960 برمی‌گردد که این محلول برای تسهیل جداسازی و آنالیز DNA و RNA طراحی شد. از آن زمان به بعد، این بافر به یکی از استانداردهای اصلی برای بسیاری از کاربردهای آزمایشگاهی تبدیل شد. تفاوت بافر TBE و TAE در قدرت بافرینگ و کاربردهای خاص آن‌ها نهفته است؛ بافر TBE پایداری بهتری در طول مدت زمان آزمایش‌ها دارد، در حالی که بافر TAE معمولاً برای آزمایش‌هایی با دقت کمتر استفاده می‌شود.

ترکیب سازنده

از ترکیبات کلیدی Tris، بورات و EDTA تشکیل شده است که هر یک از این ترکیبات نقش مهمی در عملکرد این بافر دارند:

  • Tris: یک ترکیب پایه‌ای است که به‌عنوان بافر در تنظیم و تثبیت pH محلول عمل می‌کند. این ویژگی باعث می‌شود که pH محیط در طول الکتروفورز ثابت بماند و مولکول‌های DNA و RNA در یک شرایط پایدار حرکت کنند.
  • بورات: وظیفه اصلی بورات ، پشتیبانی از بافر کردن و تنظیم pH است. این ترکیب به همراه Tris، بافرینگ قوی‌ای ایجاد می‌کند که مانع از تغییرات ناگهانی pH در طول آزمایش می‌شود.
  • EDTA: این ترکیب شیمیایی با کی‌لیت کردن یون‌های فلزی مثل کلسیم و منیزیم، از فعالیت آنزیم‌های تخریبی مثل نوکلئازها که ممکن است DNA و RNA را تجزیه کنند، جلوگیری می‌کند. به همین دلیل، از تخریب اسیدهای نوکلئیک جلوگیری می‌کند و در نتیجه، نمونه‌های شما پایدار می‌مانند.

pH پایدار:  معمولاً pH‌ای در حدود 8.0 تا 8.3 دارد که این ویژگی به‌ویژه در حفظ مولکول‌های DNA و RNA در شرایط بهینه بسیار مهم است. این pH پایدار به جلوگیری از دناتوراسیون (تخریب ساختار) اسیدهای نوکلئیک کمک می‌کند.

تهیه بافر TBE

برای ساخت بافر TBE در غلظت‌های مختلف، مراحل زیر پیشنهاد می‌شود:

  • طرز تهیه بافر TBE 5X: برای تهیه ۱ لیتر، ۵۴ گرم Tris، ۲۷.۵ گرم بوریک اسید و ۲۰ میلی‌لیتر EDTA 0.5M را در آب مقطر حل کنید و حجم را به ۱ لیتر برسانید.
  • طرز تهیه بافر TBE 1X: برای تهیه این غلظت، می‌توانید ۲۰۰ میلی‌لیتر از بافر TBE 5X را با ۸۰۰ میلی‌لیتر آب مقطر رقیق کنید.

این روش‌ ها به شما امکان می‌ دهد که بافر را به‌ صورت آماده یا با غلظت مورد نیاز خودتان تهیه کنید. طرز تهیه بافر TBE 10X نیز مشابه است، اما به‌ جای ۵۴ گرم Tris، از ۱۰۸ گرم استفاده کنید.

بافر TBE متن

کاربردها

  • الکتروفورز ژل آگارز: به دلیل پایداری بالای pH، در جداسازی دقیق مولکول‌های DNA و RNA در طول الکتروفورز به‌کار می‌رود.
  • محافظت از DNA و RNA: حضور EDTA در ترکیب این بافر، از تخریب اسیدهای نوکلئیک توسط آنزیم‌های تخریبی جلوگیری می‌کند.
  • کاربرد در آزمایش‌های حساس: به دلیل پایداری بالا در آزمایش‌هایی که به دقت بالا نیاز دارند، انتخابی ایده‌آل است.

نکات ایمنی

  • هنگام استفاده از این ترکیب، از دستکش و عینک محافظ استفاده کنید. Tris و بورات ممکن است در تماس طولانی‌مدت با پوست یا چشم‌ها حساسیت ایجاد کنند، و EDTA می‌تواند باعث تحریک پوست شود. همچنین توصیه می‌شود که از تماس مستقیم با محلول‌های غلیظ خودداری کنید.

خرید بافر TBE

برای خرید بافر TBE با کیفیت، می‌توانید به تأمین‌ کنندگان معتبری مراجعه کنید که استانداردهای لازم را رعایت می‌کنند. بایوتکنولب یکی از پلتفرم‌های معتبر در این زمینه است که با ارائه طیف گسترده‌ ای از بافرها، می‌توانید با خیالی آسوده محصول مورد نظر خود را سفارش دهید. همچنین قیمت بافر TBE بسته به غلظت و حجم مورد نیاز، متغیر است و شما می‌توانید بهترین گزینه را متناسب با نیاز آزمایشگاهی خود انتخاب کنید.